Génétique

Hybridation in situ en microscopie photonique

Gérard Morel

Parmi les méthodes de visualisation du génome, l'hybridation in situ est la principale méthode pour mettre en évidence une séquence d'acides nucléiques déterminée au sein d'un tissu ou d'une population cellulaire. L'objectif de cet ouvrage est de présenter de manière didactique, combinant théorie et pratique, le principe de cette technique et d'en faciliter la mise en œuvre. Celle-ci est décomposée par étapes. Pour chacune, les principes illustrés de schémas précèdent les protocoles détaillés, l'ensemble étant assorti des commentaires utiles, placés en vis-à-vis. Ainsi sont décrits les différents types de sondes et leur marquage, la préparation des tissus, les prétraitements, l'hybridation proprement dite, les différentes modalités de révélation selon le marqueur utilisé, l'amplification du signal, les contre-colorations et les modes d'observation. Des protocoles types sont fournis : les problèmes de sensibilité, de spécificité, de signal non spécifique sont analysés et les contrôles présentés. La préparation des matériels et solutions est exposée en annexe. Tous ces éléments seront utiles aussi bien au chercheur confirmé qu'au débutant.